BL1803A α-葡萄糖苷酶(α - GC)活性检测试剂盒 分光法

产品简介：
α-葡萄糖苷酶（α-GC，EC 3.2.1.20) 又叫α-D-葡萄糖苷水解酶，广泛分布于动植物和微生物中，是一类能够从含有α-糖苷键底物的非还原端催化水解 a-1,4-糖苷键，释放出葡萄糖，或将游离出的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1，6 糖苷键，从而得到低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等物质。α-葡萄糖苷酶与淀粉及糖原等糖代谢密切相关，对维持生物体的正常生理功能起着重要作用。
α-葡萄糖苷酶可以水解对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-葡萄糖苷酶活性。

使用方法：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
一、样本准备
1. 组织样本：
(a) 称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加 1mL 提取液，进行冰浴匀浆；(b) 12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。2. 细胞/细菌样本：
(a) 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；
(b) 取 5×10
6个细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
(c) 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，按照每 0.5~1×10
7个细菌/细胞加入 1mL 提取液进行提取。3. 液体样品：
澄清的液体样本直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
二、样品测定
1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。
2. 在离心管中依次加入：

试剂名称（μL） 测定管 对照管样本 20 20
试剂一 80 - 蒸馏水 - 80
试剂二 100 100
迅速混匀，37℃保温 30min
试剂三 600 600
混匀，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中，405nm 处测定吸光 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。【注】：1.若ΔA 较小，可以增加 37℃保温反应时间（如 1 小时）,或者增加样本上样量（如增至60μL，则试剂二相应减少），则改变后的反应时间 T 或加样体积 V1 需重新代入计算公式计算。三、结果计算
1. 标准曲线：y = 0.0237x - 0.0206；x 是 PNP 摩尔质量（nmol），y 是△A。2. 按样本蛋白浓度计算：
定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活性单位。α-GC 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0206)÷0.0237]÷(V1×Cpr)÷T×D
=70.32×(ΔA+0.0206)÷Cpr×D
3. 按样本鲜重计算：
定义：每克组织每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活性单位。α-GC 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0206)÷0.0237]÷(W×V1÷V)÷T×D
=70.32×(ΔA+0.0206)÷W×D
4. 按细菌或细胞密度计算：
定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚（PNP）为一个酶活性单位。α-GC 活性(nmol/min/10
4cell)=[(ΔA+0.0206)÷0.0237]÷(500×V1÷V)÷T×D
=0.14×(ΔA+0.0206)×D
5. 按液体体积计算：
定义：每毫升样本每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活性单位。α-GC 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0206) ÷0.0237]÷V1÷T×D=70.32×(ΔA+0.0206)×DV----加入提取液体积，1mL V1----加入反应体系中样本体积，20μL=0.02mLW----样本质量，g 500----细胞或细菌总数，万T----反应时间，30min PNP 对分子质量----139.11
D---稀释倍数，未稀释即为 1 Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL

附：标准曲线制作过程：
1. 制备标准品母液（2mg/mL）：向标准品离心管里面加入 1ml 蒸馏水。2. 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3. 在离心管中依次加入：20μL 标准品+80μL 蒸馏水+100μL 试剂二+600μL 试剂三，混匀，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中，于 405nm 下读取吸光值。
4. 根据结果制作标准曲线。

注意事项：
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：
4℃保存三个月。