BL5564B 双萤光素酶报告基因检测试剂盒

商品详情：

产品简介：

双萤光素酶报告基因检测试剂盒是一种操作简单、检测快捷、灵敏度高且半衰期长的辉光型双报告基因检测试剂盒。该试剂盒通过检测萤火虫萤光素酶活性反映启动子或调控元件的转录调控作用。通过检测作为内参的海肾萤光素酶活性，来消除细胞数量、转染效率等差异。

本产品的反应原理为：第一步，试剂盒中萤火虫荧光素酶检测缓冲液与萤火虫荧光素酶检测底物（100×）混合后，能够与细胞释放的萤火虫萤光素酶进行反应，产生半衰期约2h的光信号。通过测量光信号的强度，即可检测细胞中萤火虫萤光素酶的活性；第二步，海肾荧光素酶检测缓冲液与海肾荧光素酶检测底物（100×）混合后加入到实验板中，能快速地淬灭萤火虫萤光素酶的光信号，并使海肾萤光素酶稳定发光。通过测量光信号的强度，即可检测细胞中海肾萤光素酶的活性。

产品组分：

使用方法：

• 试剂准备

（1）将本试剂提前于室温进行融化（请勿在超25℃以上进行融化，避免活性减弱）。

（2）试剂平衡至室温后，开盖前建议离心，集中液体到瓶底。

（3）根据每次实验中的样本孔数，计算所需要的萤火虫荧光素酶检测工作液体积，按照1:99的体积比将萤火虫荧光素酶检测底物（100×）加入到萤火虫荧光素酶检测缓冲液中，即为萤火虫荧光素酶检测工作液，充分混匀，备用。例如：将10μL萤火虫荧光素酶检测底物（100×）与0.99mL萤火虫荧光素酶检测缓冲液混匀。

2、Firefly信号检测

（1）取出待测细胞培养板，室温放置20min左右，使培养板温度平衡至室温。

（2）加入与待测细胞培养基等体积的萤火虫荧光素酶检测工作液（例如：96孔板，每孔75μL细胞培养液，则加入75μL萤火虫荧光素酶检测工作液）。

（3）微孔板振荡器400rpm震荡10min，充分震荡效果更好使细胞充分裂解混匀。

（4）在酶标仪上读取发光信号。

3、Renilla信号检测

（1）按照1:99的体积比将海肾荧光素酶检测底物（100×）加入到海肾荧光素酶检测缓冲液中，充分混匀。配置本次所需量的海肾萤光素酶检测工作液，须现配现用，剩余检测工作液请丢弃。

（2）向Firefly信号检测步骤（4）中Firefly读值完成后的细胞培养板中每孔加入75μL海肾萤光素酶检测工作液（每孔总体积：225μL）。

（3）微孔板振荡器400rpm震荡10min，充分震荡效果更好，让试剂与样本充分混匀。

（4）在酶标仪上读取发光信号。

注意事项：

• 无菌操作。
• 实验操作中注意避光进行。
• 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
• 为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，需采取适当分装后避光-80℃保存的方法，避免反复冻融和长时间暴露于室温。
• 检测工作液及孵育时间可根据细胞量适当增加、延长。
• 关于检测仪器的选择：能够检测化学发光或者生物发光的仪器都可适用此试剂盒。如果使用多功能酶标仪，为防止各孔之间的干扰，黑板和白板均可，但是我们推荐使用全白板酶标板，因为黑板的信号会比白板低大约一个数量级。全白板的优势是灵敏度最高而且孔间相互干扰最小。
• PBS缓冲液会抑制萤火虫荧光素酶的活性导致信号值过低，最终测试的实验样品应避免使用PBS缓冲液。
• 海肾荧光素酶检测底物（100×）中含有高挥发性溶剂，取用后请拧紧管盖。
• 本试剂盒解冻后可能会出现沉淀，沉淀溶解后不影响溶液性能（推荐室温摇匀即可溶解）。
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-80℃避光保存，一年有效。