BL5565A 吖啶橙AO/PI双荧光染色试剂盒

商品详情：

产品简介：

AO/PI 双荧光计数法用来检测细胞浓度和活率。细胞染色液由吖啶橙（绿色荧光染料）和碘化丙锭（红色荧光染料）混合而成。碘化丙锭（PI）不具有膜透过性，只能进入细胞膜受损的细胞，而吖啶橙能够穿过所有的细胞群体。当两种染料同时存在于细胞核中，碘化丙锭通过荧光共振能量转移（FRET）引起吖啶橙荧光的减少。因此，具有完整的有核细胞染绿色荧光并被计为活细胞，而具有受损的有核细胞染红色荧光并被计为死细胞。

吖啶橙（Acridine Orange）属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料，常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，AO嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光，PI嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。吖啶橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，溴化乙锭（PI）仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞（VN），核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞（VA），核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；晚期凋亡细胞（NVA），核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞（NVN），核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、PI溶液浓度分别为100μg/ml，所含稳定剂不影响实验效果。

产品组分：

使用方法（仅供参考）：

• 使用前先根据用量，将AO溶液和PI溶液按1:1混合成工作液，现用现配。
• 对于贴壁细胞或爬片，去掉培养基，用PBS洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的PBS；如果需要观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20μl工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。
• 对于悬浮细胞，可直接加入工作液或离心收集细胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20μl工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。

注意事项：

• 如有低温离心机进行离心效果更佳。
• 操作过程中应注意减少染色溶液暴露于强光下的时间。
• 含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。
• 染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整，以期达到佳效果。
• PI和吖啶橙有一定毒性，请小心操作
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

保存条件：

4℃避光保存，有效期 1 年。