BL5609A 线粒体膜电位与细胞凋亡检测试剂盒

商品详情：

产品简介：

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素 FITC 标记，以标记了的 Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。 Mito-Tracker Red CMXRos（线粒体红色荧光探针）是一种具有细胞通透性的 X-Rosamine 衍生物，能够特异性地标记细胞中具有生物活性的线粒体。对于正常细胞，Mito-Tracker Red CMXRos 可以把其中的线粒体染色为明亮的红色荧光，而当细胞发生凋亡等时，线粒体膜电位下降，此时线粒体的红色荧光会逐渐减弱，甚至呈现红色荧光阴性。

本试剂盒检测 Mito-Tracker Red CMXRos 的红色荧光和 Annexin V-FITC 的绿色荧光。同时提供具有细胞膜亲脂的蓝色核染料 Hoechst33342。红色荧光标记保持线粒体膜电位的活细胞，绿色荧光标记的是发生了凋亡或者坏死的细胞，而 Hoechst33342 染色液便于在有需要时同时通过细胞核的碎裂和致密浓染等从形态学上观察细胞凋亡。

产品组分：

使用方法（仅供参考）：

• 细胞收集
• 悬浮细胞：300×g离心力，离心 5min 收集至离心管中，弃上清。
• 贴壁细胞：使用多孔板离心机 300×g，离心 5min，弃上清。
• 用 PBS 洗涤细胞 2 次，弃上清；

注意：需动作缓慢，避免将损伤细胞洗涤掉！

• 根据样本数量、反应容器类型，计算所需的染色液总体积。参考染色工作液制备：向 5mL EP 管 中依次加入 187μL Binding Buffer，10μL Annexin V-FITC，轻轻混匀，加入 1μL Mito-Tracker Red CMXRos 和 2μL hoechst33342 染色液，轻轻混匀（以 200μL 为例）；
• 将染色工作液转移至对应的各孔中或离心管中，进行染色；（用量可参考表 1）

表 1. 染色液的使用量参考

• 室温下避光孵育 20-30min；
• 随即在荧光显微镜下观察，Mito-Tracker Red CMXRos 为红色荧光，Annexin V-FITC 为绿色荧光，Hoechst33342 为蓝色荧光。

注意事项：

• 微量试剂取用前请离心集液。
• 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或者坏死细胞的数量增加。
• 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
• Mito-Tracker Red CMXRos 染色液和 Hoechst33342 染色液对人体有害，操作时请小心，并注意有效 防护以避免直接接触人体或吸入体内。
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存，12个月有效。