BS408-25ml NHS-Activated Sepharose 4FF 填料

商品详情：

产品简介：

NHS-Activated Sepharose 4FF是一种NHS活化形成的琼脂糖凝胶微球基质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，同生物活性大分子有很好的相容性，具有载量高、非特异性吸附少和流速快等特点。NHS-activated Sepharose 4FF可温和地同氨基基团反应，特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶和核酸等功能性生物大分子。耦合反应在 pH 7~9 的无胺缓冲液中进行，具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

产品特点：

1：层析柱 20 cm × 1.6 cm，填料高度 10±2cm，常温，溶液为 H₂O 的条件下检测。

2：耐压为扣除系统压力后的净压力。

使用方法：

NHS-activated Sepharose 4FF活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联。具体的操作步骤如下（以5mL活化胶偶联BSA为例）：

清洗、偶联缓冲液：0.2M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3；50 mL（4℃）。

1、准确称取50mg BSA溶于5.0mL 0.2M NaHCO₃+0.5M NaCl，pH8.3缓冲液，溶解完全后备用。

2、将约5mL NHS活化胶用4℃预冷的1mM HCl在G3砂芯漏斗（或离心等方法）中洗3-5次后抽干，再用0.2M NaHCO₃+0.5M NaCl，pH8.3清洗2次，抽干后将5mL NHS活化胶（约3.0g）加入到10mL的反应器（磨口三角瓶或离心管）中。

注意：清洗后应立即使用。

3、将BSA溶液加入到活化胶中，反应温度恒定在4℃（或室温/25℃），摇床中振荡混合（离心管水平放置），转速120rpm，反应过夜（或5h）。

4、反应停止后，静置，取上清离心（1000g，5min，室温），收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析（可采用Bradford、Lowry、BCA法；NHS在280nm有强吸收，不能采用OD280测定蛋白浓度），计算偶联的BSA的配基密度；将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。

5、封闭未反应的NHS：将5mL抽干的BSA亲和胶加入到25mL磨口三角瓶中，加入10mL 0.5mol/L 乙醇胺+0.5M NaCl，pH8.3溶液（或0.1mol/LTris-HCl，pH8.3）。反应温度恒定在4℃（或室温/25℃），搅拌速度120rpm，反应过夜（或5h）。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。

6、清洗

将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH4.0）、去离子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次），抽干，去除未反应的配基。

7、保存

制得的BSA亲和介质保存于2-8℃、20%乙醇溶液中。

注意事项：

1、偶联缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但不能使用氨基缓冲体系(如Tris-HCI缓冲液)。

2、稳定的配基可以直接溶于0.2M NaHCO₃，可适当提高偶联温度(如室温)将偶联时间缩短至1~2h。

3、如对配基的稳定性不够了解，可以选择不同pH值缓冲液和不同温度，用0.5~1mM配基相应浓度的溶液在无填料的条件下模拟偶联反应观察溶液是否会产生沉淀。有沉淀产生说明偶联效果不佳，可适当降低缓冲液pH值或温度。同时可以添加约5%的甘油或PEG保护蛋白，避免产生沉淀。

4、根据偶联蛋白的稳定性选择合适的偶联pH值和温度。偶联较适pH值为pH7.5~9.0，室温或4℃均可。提高偶联温度能够提高配基的偶联效率。

5、偶联蛋白溶液的浓度以5~15mg/mL为佳。偶联凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5~1:2.0为佳。

6、如果偶联的配基不稳定，可于4℃振荡偶联1~12h以维持配基的活性。偶联配基后应尽快清洗填料，避免配基在高pH条件下失活。

7、封闭缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂，如乙醇胺、Tris等，于pH8~9、室温条件下封闭数小时可完全封闭。推荐封闭缓冲液：0.5M乙醇胺、0.5M NaCl、pH8.3或0.1M Tris-HCl、pH8.5。

8、偶联中尽量使用温和的混匀方式如振荡、翻转和旋转等，如使用磁力搅拌器或者机械搅拌，需要降低搅拌速度，使填料能够混匀完全悬浮即可，避免剧烈搅拌导致凝胶微球破碎。

9、NHS-Activated Sepharose 4FF需现取现用，避免取出后放置时间过长导致活性降低。

10、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

11、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃（100%异丙醇）保存，有效期5年。