商品详情:
产品简介:
Plasmid Sepharose HP亲和层析介质是一种新型高度交联的亲硫芳香族琼脂糖层析介质,可用于超螺旋DNA的纯化分离。该层析介质具有非特异性吸附低、良好的亲水性、高流速、低反压、良好的化学稳定性和机械性能等特点。
Plasmid Sepharose HP预装柱是一种以Plasmid Sepharose HP为填料的中压预装柱,操作简单方便。
产品特点:
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基质 |
高度交联琼脂糖 |
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功能基团 |
巯基吡啶 |
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配基密度 |
⁓3.5mg/mL |
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最高流速 |
≥180cm/h |
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平均粒径 |
34μm |
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动态载量 |
≥3mg /mL |
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耐受压力 |
0.3MPa |
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耐受pH |
长期:3-13;短期:2-14 |
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化学稳定性 |
在以下液体中稳定:所有常用的水相缓冲液;1mol/L氢氧化钠;70%乙醇;40%异丙醇;1M醋酸 |
使用方法:
1、平衡:用5CV(柱体积)的平衡缓冲液(100mM Tris-HCl,2M (NH4)2SO4,10mM EDTA,pH7.5)平衡层析柱,操作流速不高于装柱流速的75%,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
2、上样:可以用样品环或泵等装置上样,样品需经孔径为0.45或0.2μm滤膜过滤并脱气处理;样品配制溶液应尽可能与结合缓冲液一致,上样量根据介质的动态结合载量或实际测定载量来确定。
3、清洗:上样后继续用平衡缓冲液清洗至紫外吸收值回归基线。
4、洗脱:用洗脱缓冲液(推荐洗脱液:100mM Tris-HCl,1.7M (NH4)2SO4,10mM EDTA,0.3M NaCl,pH7.5)洗脱,收集流出液。可以采用线性梯度、步级梯度、等度洗脱等方式,可分管收集后确定目的蛋白的洗脱条件。
5、再生:亲和层析介质在一次上样、洗脱结束后,为确保下次实验结果的可重复性,一般可用100mM Tris,10mM EDTA洗脱5倍以上柱体积,然后用结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。
6、层析柱CIP(Cleaning In Place):
(1)对于以离子键结合上去的蛋白,可用0.5~1倍柱床体积的2M NaCl去除。
(2)对于沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白或脂类,一般先用1mol/L NaOH洗脱5倍以上柱体积,然后用结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。
(3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱床体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗。
注意事项:
1、清洁和再生后的层析介质保存于20%乙醇中,2-8℃保存,切勿冷冻,建议2-3个月更换一次20%乙醇,防止乙醇挥发导致微生物滋生。
2、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
2-8℃保存,有效期5年。
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