BS445-5ml Chelating Sepharose 6FF 预装柱

商品详情：

产品简介：

金属螯合层析介质可自主选择螯合金属离子如Cu²⁺、Zn²⁺、Co²⁺等，主要原理是蛋白质的组氨酸、半胱氨酸和色氨酸可与金属离子相互作用，从而实现分离。Chelating Sepharose 6FF是以Sepharose 6FF为基质，亚氨基二乙酸为功能配基的亲和层析填料，可用于蛋白质、核酸以及多肽的分离纯化，尤其是his-tag蛋白的分离纯化。

Chelating Sepharose 6FF预装柱是一种以Chelating Sepharose 6FF为填料的中压预装柱，操作简单方便。

产品特点：

使用方法：

1、清洗：用2-3CV（柱体积）0.5-1.0M NaOH清洗，用超纯水清洗至中性。

2、螯合金属离子：用200mM金属离子溶液流经层析柱，进行金属离子螯合；超纯水冲洗层析柱，除去未结合的金属离子。

3、平衡：根据样品的稳定性、活性、等电点选择合适的缓冲液、pH范围，结合缓冲液的浓度为20~50mM，为了抑制非特异性吸附，通常还会在结合缓冲液中加入300mM或500mM的氯化钠。层析实验开始前需测定结合缓冲液电导、pH，以合适的流速平衡层析柱，当仪器检测电导、pH值达到结合缓冲液的初始值说明层析柱平衡好，一般需要2~5CV。

4、上样：可以用样品环或泵等装置上样，样品需经孔径为0.45或0.2μm滤膜过滤并脱气处理；样品配制溶液应尽可能与结合缓冲液一致，上样量根据介质的动态结合载量或实际测定载量来确定。

5、清洗：上样后继续用平衡缓冲液清洗至紫外吸收值回归基线。

6、洗脱：金属螯合层析介质通常用pH4-6的缓冲液或者用200-500mM咪唑洗脱目的蛋白，可以采用线性梯度、步级梯度、等度洗脱等方式，可分管收集后确定目的蛋白的洗脱条件。

7、再生：金属螯合层析介质在一次上样、洗脱结束后，为确保下次实验结果的可重复性，需用高浓度的盐冲洗层析柱。

8、层析柱CIP（Cleaning In Place）：金属螯合层析介质在使用后，会结合并聚集大量杂蛋白，造成柱子堵塞，反压增大，影响流速与载量，需要剥落金属离子、清洗、重新螯合金属离子。

（1）缓冲液（如50mM PB、500mM NaCl、200mM EDTA，pH7.0）进行脱去金属离子；

（2）用500mM NaCl溶液冲洗层析柱，除去柱中残留的EDTA；

（3）选用1M NaOH溶液冲洗多个柱体积以除去沉淀、疏水性较强物质；

（4）选用70%乙醇或30%异丙醇冲洗多个柱体积以除去脂类物质（使用高浓度有机溶剂时，为避免气泡产生，应逐步增加有机溶剂浓度如采取梯度方式）。

注意事项：

1、清洁和再生后的层析介质保存于20%乙醇中，2-8℃保存，切勿冷冻，建议2-3个月更换一次20%乙醇，防止乙醇挥发导致微生物滋生。

2、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

2-8℃保存，有效期5年。