BS450-5ml CM Sepharose HP 预装柱

¥528 ¥660
产品货号: BS450-5ml
品牌: Biosharp/白鲨
单位:
关键词: BS450-5ml CM Sepharose HP 预装柱

蛋白纯化试剂

商品详情:

产品简介:

离子交换层析介质CM Sepharose HP是以Sepharose HP为基质,羧甲基为功能配基的一种高分辨率弱阳离子交换层析介质。它保留了琼脂糖天然的亲水性及多孔结构,具有良好的生物兼容性,理化性能稳定,能够耐受强酸、强碱,可以在位清洗与高温灭菌。同CM Sepharose 6FF相比,分辨率更高,可以带来独特的分离效果。

离子交换层析技术依据生物分子表面净电荷差异实现分离。CM Sepharose HP应用广泛,其操作简便、易于再生、选择性好、回收率高、非特异性吸附低、结合载量高,在蛋白、病毒、核酸和多肽等纯化领域均有很好的效果。

CM Sepharose HP预装柱是一种以CM Sepharose HP为填料的中压预装柱,操作简单方便。

 

产品特点:

基质

6%高度交联琼脂糖

配基

-O-CH2COO-

离子交换容量

50~70μmol H+/mL 介质

推荐流速

<300cm/h

平均粒径

34μm

耐受耐压

0.3MPa

耐受pH

长期:4-10;短期(CIP):2-14;

化学稳定性

常用的阳离子交换缓冲液,1M氢氧化钠、6M盐酸胍、70%乙醇、30%异丙醇。

 

使用方法:

1、清洗:用2-3倍柱体积的0.5M NaOH清洗,用超纯水清洗至中性

2、平衡:根据样品的稳定性、活性、等电点选择合适的缓冲液、pH范围,离子交换层析时需要结合缓冲液和洗脱缓冲液。一般来说,阳离子交换层析选择阳离子交换推荐缓冲液,结合缓冲液的浓度为20~50mmol/L,pH一般低于目的蛋白等电点1~3个pH单位;层析实验开始前需测定结合缓冲液电导、pH,以合适的流速平衡层析柱,当仪器检测电导、pH值达到结合缓冲液的初始值说明层析柱平衡好,一般需要2~5个柱体积。

3、上样:可以用样品环或泵等装置上样,样品需经孔径为0.45或0.22μm滤膜过滤并脱气处理;样品配制溶液应尽可能与结合缓冲液一致,上样量根据离子交换介质的结合载量或者实际测定载量来确定。

4、清洗:上样后继续用平衡缓冲液清洗至紫外吸收值回归基线。

5、洗脱:离子交换层析有盐浓度、pH两种洗脱类型,可采用线性梯度、步级梯度、等度洗脱等方式,根据需要可分管收集样品确定目的蛋白洗脱条件。

6、再生:离子交换层析介质在一次上样、洗脱结束后,为确保下次实验结果的可重复性,需用高浓度的盐,比如1~2M氯化钠冲洗层析柱,特殊情况下也可再用0.5~1M氢氧化钠冲洗层析柱,注意,一定要用超纯水或结合缓冲液将层析柱冲洗至离子强度、pH稳定方可继续平衡再次使用。

7、层析柱CIP(Cleaning In Place):离子交换层析柱在多次使用后,会结合并聚集大量杂蛋白,造成柱子堵塞,反压增大,影响流速与载量,需要定期对层析柱清洗与再生,根据纯化样品情况选择CIP方式。

(1)选用2M NaCl溶液冲洗多个柱体积以除去结合能力较强的物质;

(2)选用1M NaOH溶液冲洗多个柱体积以除去沉淀、疏水性较强物质;

(3)选用70%乙醇或30%异丙醇冲洗多个柱体积以除去脂类物质(使用高浓度有机溶剂时,为避免气泡产生,应逐步增加有机溶剂浓度如采取梯度方式);

(4)清洗结束后需要用超纯水或缓冲液冲洗至电导、pH稳定。

 

注意事项

1、清洁和再生后的层析介质保存于20%的乙醇中,2-8℃保存,切勿冷冻,建议2-3个月更换一次20%乙醇,防止乙醇挥发导致微生物滋生。

2、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

2-8℃保存,有效期5年。

 

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